研究报告/Research Report

小白杏自交不亲和基因S-RNase的克隆及正、反义表达载体的构建  

刘小芳1 , 冯建荣1* , 刘海楠1 , 吕文娟1 , 罗明2 , 李文慧1
1石河子大学农学院, 特色果蔬栽培生理与种质资源利用兵团重点实验室, 石河子, 832000;
2西南大学生物技术中心, 农业部生物技术与作物品质改良重点开放实验室, 北碚, 400715
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2016 年, 第 14 卷, 第 12 篇   
收稿日期: 2016年03月21日    接受日期: 2016年03月23日    发表日期: 2016年03月25日
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摘要

本研究以新疆栽培杏品种小白杏(Prunus armeniaca L. cv.)为试验材料,利用特异引物(索柱full1/索柱full2)扩增S66-RNase(GenBank登陆中)。将S66-RNase(cDNA)插入到克隆载体pMD19-T后,获得pMD-S66-RNase,借助中间表达载体PBS-T,利用两次双酶切(HindIII/BamHI和KpnI/BamHI)连接,将克隆的S66-RNase基因片段(cDNA)正向插入到pCAMBIA中,构建S66-RNase基因正义表达载体pCAMBIA-Sense-S66-RNase;利用pMD-Antise-S66-RNase与pCAMBIA上一致的酶切位点(HindIII和BamHI),通过酶切连接的方法,将克隆的S66-RNase基因片段(cDNA)反向重组到表达载体中,构建S66-RNase基因反义表达载体pCAMBIA-Antise-S66-RNase;用电击转化法将重组质粒转化至农杆菌LBA4404中。结果显示,通过RT-PCR获得739 bp的S66-RNase基因(cDNA)片段,其ORF长度为672bp(第44-714bp)。对两个表达载体进行酶切检验显示,S66-RNase基因(cDNA,739bp)正确地插入到pCAMBIA的CaMV35S启动子和NOS终止子之间,表明S66-RNase基因的正义、反义表达载体构建成功;经PCR限制性内切酶酶切和测序鉴定表明本研究也成功地将S66-RNase基因正义和反义两种表达载体转入农杆菌LBA4404中。在本研究中,克隆出了S66-RNase的ORF获得了S66-RNase的正义和反义表达载体,为深入的研究果树S-RNase基因功能和自交不亲和机制的提供了帮助。

关键词
杏;S-RNase基因;自交不亲和;正义表达载体;反义表达载体

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《分子植物育种》印刷版
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