刘小芳¹ , 冯建荣^1* , 刘海楠¹ , 吕文娟¹ , 罗明² , 李文慧¹

1石河子大学农学院, 特色果蔬栽培生理与种质资源利用兵团重点实验室, 石河子, 832000;
2西南大学生物技术中心, 农业部生物技术与作物品质改良重点开放实验室, 北碚, 400715
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《分子植物育种》印刷版, 2016 年, 第 14 卷, 第 12 篇   
收稿日期: 2016年03月21日    接受日期: 2016年03月23日    发表日期: 2016年03月25日

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本研究以新疆栽培杏品种小白杏(Prunus armeniaca L. cv.)为试验材料，利用特异引物(索柱full1/索柱full2)扩增S₆₆-RNase(GenBank登陆中)。将S₆₆-RNase(cDNA)插入到克隆载体pMD19-T后，获得pMD-S₆₆-RNase，借助中间表达载体PBS-T，利用两次双酶切(HindIII/BamHI和KpnI/BamHI)连接，将克隆的S₆₆-RNase基因片段(cDNA)正向插入到pCAMBIA中，构建S₆₆-RNase基因正义表达载体pCAMBIA-Sense-S₆₆-RNase；利用pMD-Antise-S₆₆-RNase与pCAMBIA上一致的酶切位点(HindIII和BamHI)，通过酶切连接的方法，将克隆的S₆₆-RNase基因片段(cDNA)反向重组到表达载体中，构建S₆₆-RNase基因反义表达载体pCAMBIA-Antise-S₆₆-RNase；用电击转化法将重组质粒转化至农杆菌LBA4404中。结果显示，通过RT-PCR获得739 bp的S₆₆-RNase基因(cDNA)片段，其ORF长度为672bp(第44-714bp)。对两个表达载体进行酶切检验显示，S₆₆-RNase基因(cDNA，739bp)正确地插入到pCAMBIA的CaMV35S启动子和NOS终止子之间，表明S₆₆-RNase基因的正义、反义表达载体构建成功；经PCR限制性内切酶酶切和测序鉴定表明本研究也成功地将S₆₆-RNase基因正义和反义两种表达载体转入农杆菌LBA4404中。在本研究中，克隆出了S₆₆-RNase的ORF，获得了S₆₆-RNase的正义和反义表达载体，为深入的研究果树S-RNase基因功能和自交不亲和机制的提供了帮助。

杏；S-RNase基因；自交不亲和；正义表达载体；反义表达载体